Cell counting KIT-8 (CCK-8)

产品简介：

Cell counting KIT-8 (CCK-8)简称CCK-8 试剂盒，为MTT 法的替代方法，是一种基于WST(水溶性四唑盐，化学

名：2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑单钠盐)的广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的

快速高灵敏度检测试剂盒。CCK-8 试剂盒可用于药物筛选、细胞增殖测定、细胞毒性测定、肿瘤药敏等试验

Cell counting KIT-8 (CCK-8)使用说明：

一、制作标准曲线(测定细胞具体数量时)

1、先用细胞计数板计数所制备的细胞悬液中的细胞数量，然后接种细胞。

2、按比例依次用培养基等比稀释成一个细胞浓度梯度，一般要做3-5 个细胞浓度梯度，每组3-6 个复孔。

3、接种后培养细胞贴壁，然后加CCK-8 试剂培养一定时间后测定OD 值，制作出一条以细胞数量为横

坐标(X 轴)，OD 值为纵坐标(Y 轴)的标准曲线。根据此标准曲线可以测定出未知样品的细胞数量(试用

此标准曲线的前提是实验的条件要*，便于确定细胞的接种数量以及加入CCK-8 后的培养时间。)

二、细胞活性检测

1、在96 孔板中接种细胞悬液(100μL/孔)。将培养板放在培养箱中预培养(在37℃,5% CO2 的条件下)。

2、向每孔加入10μL CCK-8 溶液(注意不要在孔中生成气泡，它们会影响OD 值的读数)。

3、将培养板在培养箱内孵育1-4 小时。

4、用酶标仪测定在450nm 处的吸光度。

5、如果暂时不测定OD 值，打算以后测定的话，可以向每孔中加入10μL 0.1M 的HCl 或者1%SDS(W/V)

溶液，并遮盖培养板避光保存在室温条件下。在24 小时内吸光度不会发生变化。

三、细胞增值-毒性检测

1、在96 孔板中配置100 μL 的细胞悬液。将培养板在培养箱预培养24 小时(在37 ℃，5% CO2 的条件下)。

2、向培养板加入10μL 不同浓度的待测物质。在培养箱孵育一段适当的时间(例如：6、12、24 或48 小时)。

3、向每孔加入10 μL CCK-8 溶液(注意不要在孔中生成气泡，它们会影响OD 值的读数)。如果待测物质

有氧化性或还原性的话，可在加CCK-8 之前更换新鲜培养基(除去培养基，并用培养基洗涤细胞两次，然后加

入新的培养基)，去掉药物影响。

4、将培养板在培养箱内孵育1-4 小时。

5、用酶标仪测定在450 nm 处的吸光度。

6、如果暂时不测定OD 值，打算以后测定的话，可以向每孔中加入10μL 0.1M 的HCl 或者1%SDS(W/V)

溶液，并遮盖培养板避光保存在室温条件下。在24 小时内吸光度不会发生变化

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